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细胞培养液的配制.ppt

muziwendang 阅读 176 已下 26ppt格式 大小 9.71 MB 共27页 时间2023-06-13 16:31:10
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细胞培养液的配制.ppt课件简介: 胞培液的配制细养培养基的选择依据:经验、文献、尝试常用:RPMI1640、DMEM培养基的来源市售干粉培养基---自己配制液体培养基---直接使用(注意有效期)培养基的除菌方法过滤除菌:(1)正压过滤---效率高(2)负压过滤---效率低高压蒸气灭菌:不含谷氨酰胺,灭菌后另外添加培养基附加成分的添加按使用说明或实验要求添加配制时加:碳酸氢钠、抗生素、血清等临用前加:生物活性因子如EGF、FGF、NGF、PDGF等RPMI1640培液配制程养过准备物品(1)不锈钢过滤器,滤膜(0.45μm,0.22μm),磁力搅拌器,天平,烧杯,量筒,盐水瓶(2)培养粉,1NHCl,NaHCO3,青霉素,链霉素,胎牛血清,新鲜三蒸水消毒物品滤器中放置0.45μm和0.22μm滤膜,包装,高压蒸气消毒配制步骤(1)10.4g/包培养粉溶至1L三蒸水中,磁力搅拌20min(2)加2gNaHCO3/L,继续搅拌10min(3)加青霉素100U/mL(80万U溶至4ml三蒸水,取0.5ml)链霉素100U/mL(100万U溶至5ml三蒸水,取0.5ml))(4)加1NHCl约3mL,调pH至7.2,继续搅拌(5)按要求加血清(血清一般需经56℃,30min灭活)例如:10%胎牛血清无血清培养液900ml灭活胎牛血清100ml(6)正压过滤除菌(气压适当,防止滤膜破裂)(7)分装,贮存于4℃,2周内用完。(8)无菌试验:取样,37℃放置24-72h,无细菌、霉菌污染方可使用注意事项谷氨酰胺在溶液中很不稳定,4℃,7d分解50%,放置两周以上时,根据需要添加谷氨酰胺。配制100×母液(200mmol/L,即29.22g/L),每100ml加入0.5-2ml母液,终浓度1-4mmol/L抗生素在37℃稳定性维持3-4d,可控制轻度污染。防污染重在无菌操作培养液配制过程(以RPMI1640为例)1.物品准备(1)滤器、微孔滤膜、磁力搅拌器...
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